Diffust storcellet B-celle lymfom (DLBCL) er den mest udbredte type af non-Hodgkin lymfom (NHL) blandt voksne med ca. 450 nydiagnosticerede patienter i Danmark hvert år. DLBCL er fortsat en signifikant klinisk udfordring, da ca. 40% af patienterne ikke helbredes ved standard første line behandling med immunokemoterapi bestående af rituximab, cyclophosphamid, doxorubicin, vincristin og prednison (R-CHOP), med i stedet oplever refraktær eller relaps af deres sygdom.
Afhængigt af risikoprofilen er den relative 5-årige overlevelsesrate mellem 50-80%, og behandlingssvigt er ofte forårsaget af behandlingsresistens. I de sidste ti år har ”next-generation-sequencing” analyser af DLBCL bidraget til at øge indsigten og forståelsen af det genetiske og epigenetiske landskab af sygdommen, som og responset af behandlingen. De identificerede genetiske ændringer betyder afvigende aktivering af flere signalveje og cellulære processer, herunder immunovervågning, B-celle differentiering, B-cellereceptor signalering og epigenetisk remodeling. Imidlertid eksisterer der kun begrænset indsigti de specifikke molekylære karakteristika, der ligger til grund for behandlingsresistens, og hvordan det overordnet påvirker aggressiv carcinogenese og cellulære interaktion melleum maligne celler og immuneffektorceller i tumorens mikromiljø. I teorien genkendes maligne celler i de tidlige stadier af carcinogenese af natururlige dræberceller (NK-celler), der genkender specifikke ligander udtrykt på tumorceller. Aktiverede makrofager, dendritiske celler og T- og B-celler fremmer produktionen af cytokiner og aktiveringaf tumorspecifikke T-celler (CD8+ cytotoksiske T-celler), som er vigtige for udvikling af immun respons mod specifikke tumor antigener. I tilfælde, hvor immuneffektorcellerne ikke kan eliminere ondartede celler, udvikler der sig imidlertid en ligevægtstilstand (equilibrium). Til sidst undgår eller undertrykker maligne celler anti-tumorimmunresponset, hvilket muliggør immunudundslipning (escape) og en progression i tumorudviklingen. Herved kan tumorcellerne undgå værtens immunovervågning (IS) ved at deaktivere antigenpræsentation eller ved at fremme immunudmattelse eller undertrykkelse af immuneffektorceller.
Det overordnede mål med Marijana Nesics ph.d.-afhandling var at undersøge rollen af gener relateret til immunovervågning hos DLBCL-patienter og at identificere genetiske ændringer, der er forskellige mellem diagnostiske og refraktære/relaps DLBCL-patienter. Desuden har vi haft fokus på at udvikle en guide til optimale præanalytiske variabler så bedst mulige processerings-principper bestemmes så oprensning af cirkulerende celle frit (cfDNA) og påvisning cirkulerende tumor-DNA (ctDNA) ) er muligt.
I artikel I har Marijana Nesic identificeret 58 gener involveret i immunovervågning af DLBCL ved at gennemgå litteraturen og forskellige databaser med genom information for DLBCL. For 10 af de mest hyppige og mest robust påviste gener blev der lavet sammenligninger på tværs af studier for at vurdere deres diagnostiske og prognostiske relevans.
I artikel II blev de 58 gener, der var relateret til IS, undersøgt i 30 diagnostiske (kurerede) og 17 refraktære/relapsede DLBCL biopsier ved hel-eksom-sekventering (WES). For 36 ud af de 58 gener blev der observeret genetiske ændringer i henholdsvis 22 (73%) af de diagnostiske DLBCL (dDLBCL) patienter og 13 (77%) af refraktære/relapsed DLBCL-patienter. Forskergruppen observerede 3,2 fold reduceret antal muterede IS-gener i refraktær/relapsede DLBCL patienter, men mere end 50% af de muterede gener havde øget genmutationsfrekvens i refraktære/relapsed DLBCL sammenlignet med diagnostiske DLBCL patienter, hvilket tyder på en kritiske rolle for disse gener i udvikling og progression af sygdommen og behandlingsresistens.
I artikel III fokuserede Marijana Nesic på analyse af flydende biopsier som en ikke-invasiv kilde til tumormateriale i form af cirkulerende tumor-DNA (ctDNA) efter optimering af forskellige processerings trin. Præ-analytiske variable som blod opsamlingsrør, centrifugeringskraft, opbevaringstid og oprensning af cellefrit DNA (cfDNA) blev testet og muligheden for at detektere ctDNA i arkiv-plasmaprøver gemt i mere end ni år ved hjælp af ddPCR blev vurderet.
Tid og sted
Ph.d.-forsvaret afholdes fredag den 23. april kl. 13.00. På grund af Covid-19 foregår forsvaret online via zoom. Tilmelding via mail til inst.klinisk.phd@dcm.aau.dk.
Vejledere og bedømmelsesudvalg
Vejledere
- Karen Dybkær, Professor, PhD
Department of Clinical Medicine, Aalborg University, Department of Hematology, Aalborg University Hospital, Denmark
- Martin Bøgsted, Professor, PhD
Department of Clinical Medicine, Aalborg University, Department of Hematology, Aalborg University Hospital, Denmark
- Inge Søkilde Pedersen, Professor
PhD, Department of Clinical Medicine, Aalborg University, Department of Molecular Diagnostics, Aalborg University Hospital, Denmark
- Tarec Christoffer El-Galaly, Professor, DMSc
Department of Clinical Medicine, Aalborg University, Department of Hematology, Aalborg University Hospital, Denmark
Bedømmelsesudvalg
- Christina Brock, Professor, PhD (formand)
Department of Clinical Medicine, Aalborg University, Denmark
- Sara Charlotte Andersson Ek, Professor, PhD
Department of Immunotechnology, Lund University, Sweden
- Charlotte Guldborg Nyvold, Professor, PhD
Department of Hematology, Odense University Hospital, Denmark